# Produção de proteínas heterólogas em microalga

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- Authors: Jo Vitor Dutra Molino
- Journal: Zenodo (CERN European Organization for Nuclear Research)
- Year: 2017
- DOI: 10.5281/zenodo.1222094
- Instrument used: openQCM

## Abstract

Resumo Microalgas são um sistema atrativo para expressão de proteínas recombinantes por sua facilidade de produção em larga escala e baixo custo de cultivo. Microalgas quando usadas em estratégias de secreção de proteínas alvo são especialmente interessantes pois o processo de secreção permite: ● separar e purificar a proteína alvo de uma matriz simples, impactando custo e qualidade; ● cultivar as células com perfusão, aumentando produtividade e reduzindo tamanho de unidades de processamento; ● usar certos maquinários moleculares para modificações pós-traducionais, como glicosilação. Apesar de todas as vantagens listadas, nós identificamos pelo menos duas lacunas relacionadas ao desenvolvimento dessa plataforma de expressão: (1) estudos com peptídeo sinal (PS) são escassos, não permitindo escolha de PS com maior eficiência de secreção e normalmente obtêm baixos rendimentos (2) fotobiorreatores de escala laboratorial comerciais, não permitem paralelização de experimentos por seu custo proibitivo, reduzindo velocidade de desenvolvimento Para reduzir essas lacunas o trabalho foi organizado em duas partes: ● melhoramento das ferramentas moleculares, com avaliação de 7 proteínas fluorescentes (PF) como repórteres de secreção em Chlamydomonas reinhardtii e avaliação de 10 PSs, ● desenvolvimento de equipamentos de baixo custo para cultivo de microalgas recombinantes Realizado de forma a permitir comparação direta entre os PSs e cultivo da cepa recombinante em condições de alta produtividade (fotobiorreator), o trabalho objetivou obter alto rendimento de secreção pelas cepas recombinantes. Apesar do sucesso na secreção das 7 proteínas fluorescentes (ciano: mCerulean; verde: GFP e Emerald; laranja: cOFP, tdTomato; e vermelho mCherry), a eficiência de cada PF como repórter foi influenciada por sua região de fotoatividade. Os resultados sugerem que na região do laranja e vermelho há uma menor interferência pelos pigmentos celulares, já que elevadas relações sinal ruído (SN = 7,7 - 16,0) foram obtidas nessa região. Além disso, essas PFs apresentaram alta frequência de colônias positivas (>75%), com exceção da tdTomato (

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